В глубоких участках анастомоза, вокруг артефактов, связанных с нитями полипропиленовой сетки, уже на этом сроке визуализируются упорядоченные плотные межклеточные соединительно-тканные структуры. Однако некоторое количество обедненного кислыми гликозаминогликанами межклеточного матрикса сохраняется в прилежащей ко дну желудка части анастомоза (см. рис. 4).
20-е сутки после оперативного вмешательства. В 1-й группе сравнения (гастростомия по Witzel) в зоне гастростомы со стороны передней брюшной стенки отмечалось завершение реэпителизации участка контакта эпителия желудка и эпидермиса кожи, с полной дифференцировкой эпидермальных слоев. Неравномерная толщина эпидермиса сохранялась. Локальное увеличение толщины эпидермиса обусловливалось утолщением шиповатого и зернистого слоев. Эпителиальные сосочки были более многочисленные и по своей форме приближались к таковым у интактных кроликов. Отмечен рост количества кожных придатков, представленных многочисленными волосяными фолликулами собранными в группы. Коллагеновые волокна заполняли весь объем зоны сформированного рубца и имели извитой ход (рис. 5). Подлежащий соединительнотканный каркас был более зрелым по сравнению с морфологической картиной предыдущего срока этой группы животных.
На ряде микропрепаратов животных из 1 -й группы сравнения и животных из 2-й группы сравнения (см. рис. 5, 6) сохранялись очаги, содержащие в себе клеточный детрит.
&hide_Cookie=yes)
Рис. 5. 20-е сутки после оперативного вмешательства. 1-я группа сравнения (гастростомия по Witzel): А. Окраска гематоксилином и эозином. Поверхность анастомоза со стороны передней брюшной стенки. Формирование придатков кожи (×10); Б. Окраска гематоксилином и эозином. Формирование толстой соединительнотканной капсулы вокруг хирургической нити (×10); В. Окраска альциановым синим, рН 2,5. Дефект на месте хирургической нити в глубине анастомоза. Рядом - скопление клеток-нерезидентов (×40); Г. Фрагмент фотографии. Группы клеток-нерезидентов между новообразованными соединительнотканными волокнами в глубоких слоях анастомоза (×40)
Fig. 5. 20th day after surgery. 1st comparison group (Witzel gastrostomy): A. Stained with hematoxylin-eosin. The surface of the anastomosis from the side of the anterior abdominal wall. Formation of skin appendages (×10); B. Stained with hematoxylin-eosin. Formation of a thick connective tissue capsule around the surgical thread (×10); C. Alcian blue staining, pH 2.5. Defect at the site of the surgical thread in the depth of the anastomosis. Next to it is a cluster of non-resident cells (×40); D. Photo fragment. Groups of non-resident cells between newly formed connective tissue fibers in the deep layers of the anastomosis (×40)
&hide_Cookie=yes)
Рис. 6. 20-е сутки после оперативного вмешательства. 2-я группа сравнения (гастростомия способом Depage-Janeway): А. Окраска гематоксилином и эозином. Поверхность анастомоза со стороны передней брюшной стенки. Место перехода многослойного плоского ороговевающего эпителия передней брюшной стенки в однослойный призматический эпителий желудка (×10); Б. Окраска гематоксилином и эозином. Участок массивного некроза с формированием клеточно-ядерного детрита (×10); В. Окраска альциановым синим, рН 2,5. Рядом - скопление клеток-нерезидентов в глубоких слоях анастомоза (×40)
Fig. 6. 20th day after surgery. Сomparison group 2 (gastrostomy by the Depage-Janeway method): A. Stained with hematoxylin and eosin. The surface of the anastomosis from the side of the anterior abdominal wall. The place of transition of the stratified squamous keratinizing epithelium of the anterior abdominal wall into the single-layer prismatic epithelium of the stomach (×10); B. Stained with hematoxylin-eosin. An area of massive necrosis with the formation of cellular nuclear detritus (×10); C. Alcian blue staining, pH 2.5. Next to it is an accumulation of non-resident cells in the deep layers of the anastomosis (×40)
Во 2-й группе сравнения (гастростомия способом Depage-Janeway) более толстый эпидермальный слой по мере приближения к зоне искусственного перехода в однослойный призматический эпителий желудка сглаживался, утрачивал роговой слой и придатки кожи (см. рис. 6). Многочисленные субэпидермальные сосуды, характерные для 10-х суток после моделирования гастростомии по Depage-Janeway, через 20 сут запустевали.
Аналогичные изменения со стороны микроциркуляторного русла отмечались и в глубоких участках соединительной ткани гастростомы по Depage-Janeway (см. рис. 6).
В основной группе (оригинальный способ гастростомии) значительное усложнение хода базальной мембраны эпидермиса сохранялось по всей поверхности эпидермиса, примыкающего к зоне анастомоза. Мало того, она еще распространялась на переходную зону непосредственного контакта с эпителием желудка (рис. 7). В этом месте он редуцировался, приобретая однослойный многорядный призматический характер. Однако процессы ороговения сохранялись.
&hide_Cookie=yes)
Рис. 7. 20-е сутки после оперативного вмешательства. Основная группа (оригинальный способ гастростомии). Окраска альциановым синим, рН 2,5: А. Поверхность анастомоза со стороны передней брюшной стенки. Место перехода многослойного плоского ороговевающего эпителия передней брюшной стенки в однослойный призматический эпителий желудка. Видны многочисленные сосочки и инвагинации (×40); Б. Поверхность анастомоза со стороны передней брюшной стенки. Многочисленные придатки кожи. Видно, что инвагинации эпителия соответствуют тангенциальным волокнам новообразованной соединительной ткани (×10)
Fig. 7. 20th day after surgery. Main group (original method of gastrostomy). Alcian blue stain, pH 2.5: A. The surface of the anastomosis from the side of the anterior abdominal wall. The place of transition of the stratified squamous keratinizing epithelium of the anterior abdominal wall into the single-layer prismatic epithelium of the stomach. Numerous papillae and invaginations are visible (×40); B. The surface of the anastomosis from the side of the anterior abdominal wall. Numerous skin appendages. It can be seen that the invaginations of the epithelium correspond to the tangential fibers of the newly formed connective tissue (×10)
В глубоких участках анастомоза визуализируются многочисленные упорядоченные плотные межклеточные соединительнотканные структуры. Между волокнами и в непосредственной близости от артефактов, связанных с элементами полипропиленовой сетки, определяются скопления клеток воспалительно-клеточного инфильтрата (рис. 8). Участков некроза или скоплений клеточного детрита в основной группе исследования (оригинальная методика операции) не выявлено. В глубоких слоях новообразованной соединительной ткани сохранялись хаотично расположенные коллагеновые волокна, перемежающиеся с участками соединительной ткани, обедненной кислыми гликозаминогликанами. Артефакты, формировавшиеся на месте хирургических нитей, были окружены соединительнотканной капсулой с участками лимфоцитарного инфильтрата (рис. 8).
&hide_Cookie=yes)
Рис. 8. 20-е сутки после оперативного вмешательства. Основная группа (оригинальный способ гастростомии). Окраска альциановым синим, рН 2,5: А. Глубокие слои анастомоза. Место контакта новообразованной соединительной ткани с поперечнополосатыми волокнами прямой мышцы живота. Граница контакта сложная, видны инвагинации на границе двух тканей (×10); Б. Соединительная ткань анастомоза. Клетки-нерезиденты в форме тонкой прослойки между волокнами новообразованной соединительной ткани (×40); В. Участок анастомоза со стороны слизистой оболочки желудка. Частично сохранены структуры полипропиленовой сетки с окружающей соединительной тканью (×40)
Fig. 8. 20th day after surgery. Main group (original method of gastrostomy). Alcian blue stain, pH 2.5: A. Deep layers of anastomosis. The place of contact of the newly formed connective tissue with the striated fibers of the rectus abdominis muscle. The contact boundary is complex, intussusceptions are visible at the border of two tissues (×10); B. Connective tissue of the anastomosis. Non-resident cells in the form of a thin layer between the fibers of the newly formed connective tissue (×40); C. Anastomosis site from the side of the gastric mucosa. Partially preserved structures of the polypropylene mesh with the surrounding connective tissue (×40)
По данным морфометрического исследования, наибольшее количество клеток воспалительного инфильтрата в поле зрения характерно для микропрепаратов 1-й и 2-й групп сравнения, спустя 10 сут после операции (см. таблицу), однако в дальнейшем, спустя 20 сут после операции, ситуация меняется - максимальная клеточная площадь наблюдается уже в основной группе (оригинальный метод исследования с полипропиленовым эндопротезом). Это обусловлено высоким процентом клеток-нерезидентов спустя 20 сут после операции: лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов, которая составила 23,8%, в то время как в 1-й и во 2-й группах эти показатели составили соответственно 15,7 и 13,4%.
Морфометрические показатели соединительной ткани в зоне анастомоза
&hide_Cookie=yes)
* Отличие к 1-й группе сравнения достоверно, p<0,05; ** отличия ко 2-й группе сравнения достоверны, p<0,05; *** отличия к 10-м суткам основной группы (оригинальная методика операции) достоверны, p<0,05.
Снижение количества клеток воспалительного инфильтрата сопровождается снижением удельной площади сосудов микроциркуляторного русла новообразованной соединительной ткани анастомоза. Однако в исследуемых группах оно имеет динамику противоположную: наибольшая удельная площадь отмечается во 2-й группе сравнения - на 20-е сутки исследования, она на 75% превосходит показатели основной группы и на 36% показатели 1-й группы сравнения.
Обсуждение
Некротические изменения вокруг шовного материала на ранних сроках сопровождаются формированием клеточного детрита, на поздних - возникновением толстых соединительно-тканных капсул с грубыми фибрознодегенеративными изменениями и признаками воспалительной реакции [26]. Альтерация связывается не только с механическим повреждением тканей или проникновением инфекционных агентов, но и с нарушениями микроциркуляции [27, 28], при этом организация микроциркуляторного русла кожи и стенки желудка имеет значительные отличия [29], что провоцирует нарушения гемодинамики в зоне гастростомы, которые на фоне воспалительных реакций сопровождаются нарушением тканевого метаболизма и ростом маркеров перекисного окисления липидов [30].
Степень выраженности воспалительных изменений вокруг нитей, выявленная в ходе нашего исследования, обратно пропорциональна срокам эксперимента, что согласуется с литературными данными [25] и является значимым преимуществом по сравнению с изолированным использованием шовных материалов. Активация механизмов апоптоза в эндотелиоцитах в этих условиях может препятствовать расширению новообразованных сосудов и ингибировать ангиогенез [31]. Таким образом, нарушения кровообращения, наблюдаемые в нашем исследовании в группе с моделью гастростомии Depage-Janeway, могут играть значимую роль в развитии комплекса раневых осложнений, которые имеется возможность минимизировать при помощи оригинального метода гастростомии.
В литературе описаны особенности репаративных процессов под влиянием полипропиленовых имплантатов, а именно активация фибробластов, раннее (на 5-й день) формирование грануляционной ткани с множеством тонкостенных сосудов и ранней (на 10-е сутки) коллагенизацией межуточного матрикса. К 14-м суткам интерстициальная воспалительная инфильтрация значительно редуцируется [23], что согласуется с данными, полученными в нашем исследовании.
Заключение
Более выраженные морфологические изменения в зоне гастростомии в виде возникновения некроза микроокружения и нарушений микроциркуляции по застойному типу обусловлены повреждающим действием шовного материала на микроскопическом уровне. Они возникали в группах исследования, где операция проводилась без использования полипропиленовой сетки. Применение полипропиленовой сетки достоверно снижает некротические изменения в тканях вокруг шовного материала за счет тканевых перестроек, вызванных спецификой фибриллогенеза под влиянием полипропилена, что способствует более надежной фиксации гастростомы и снижению механической нагрузки на лигатуры ввиду повышения прочности новообразованной соединительной ткани.
Литература
1. Павелец К.В. Новый способ гастростомии как этап хирургического лечения ожогов пищевода // Вестник хирургии имени И.И. Грекова. 2012. Т. 171, № 4. С. 68-70.
2. Kawahara H. Can laparoscopic antireflux surgery improve the quality of life in children with neurologic and neuromuscular handicaps // J. Pediatr. Surg. 2004. Vol. 39, N 12. P. 1761-1764.
3. Angsten G., Danielson J., Kassa A.M., Lilja H.E. Outcome of laparoscopic versus open gastrostomy in children // Pediatr. Surg. Int. 2015. Vol. 31. P. 1067-1072.
4. Fox D., Campagna E.J., Friedlander J., Partrick D.A., Rees D.I., Kempe A. Nationaltrends and outcomes of pediatric gastrostomy tube placemen // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2014. Vol. 59. P. 582-588.
5. Vasseur M.S., Reinberg O. Laparoscopic technique to perform a true Stamm gastrostomy in children // J. Pediatr. Surg. 2015. Vol. 50. P. 1797-1800.
6. Барановский А.Ю., Тимофеева Н.М. Научные основы питания здорового и больного человека // Вестник Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования. 2010. Т. 2, № 1. С. 66-82.
7. Десятниченко К.С., Леонтьев В.К. О механизме взаимосвязи ротовой фазы пищеварения, состояния полости рта и желудочной секреции // Институт стоматологии. 2007. № 3 (36). С. 102-103.
8. Костюченко Л.Н., Костюченко М.В., Смирнова О.А. Метаболические осложнения при парентерально-энтеральном питании // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2015. № 8 (120). С. 51-55.
9. Hollander F. The gastric pouch from its origins to the present; an historical study in the methodology of gastric physiological contributions of Pavlov // J. Mt Sinai Hosp. N. Y. 1951. Vol. 17, N 6. P. 872-885. PMID: 14814509.
10. Tonkikh A.V. Pavlov’s theory on digestion and its significance in medicine // Sov. Vrachebnyi Sb. 1949. Vol. 17. P. 7-12. PMID: 15418378.
11. Gottschalk A., Strotzer M., Feuerbach S., Rogler G., Seitz J., Völk M. CT-guided percutaneous gastrostomy: success rate, early and late complications // Rofo. 2007. Vol. 179, N 4. P. 387-395.
12. Hucl T., Spicak J. Complications of percutaneous endoscopic gastrostomy // Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2016. Vol. 305. P. 769-781. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bpg.2016.10.002
13. Park S.K., Kim J.Y., Koh S.J., Lee Y.J., Jang H.J., Park S.J.; Small Intestine and Nutrition Research Group of the Korean Association for the Study of Intestinal Diseases (KASID) // Surg. Endosc. 2018 Aug 21. DOI: https://doi.org/10.1007/s00464-018-6339-1
14. Завьялова А.Н., Гостимский А.В., Лисовский О.В., Гавщук М.В., Карпатский И.В., Погорельчук В.В. и др. Энтеральное питание в паллиативной медицине у детей // Педиатрия 2017. Т. 8, № 6. С. 105-113.
15. Козлов Ю.А. Лапароскопическая гастростомия у детей раннего возраста // Детская хирургия. 2013. № 3. С. 16-20.
16. Козлов Ю.А., Новожилов В.А., Распутин А.А. и др. Cравнение методов гастропексии при выполнении лапароскопической гастростомии у новорожденных и детей грудного возраста // Детская хирургия. 2017. Т. 21, № 5. С. 234-238.
17. Митупов З.Б. Минимально инвазивные вмешательства в торакальной хирургии детского возраста : автореф. дис. - д-ра мед. наук: 14.01.19. Москва, 2010. 47 с.
18. Овчинникова И.Г., Лазарева Л.А., Борчанинова Ю.В. Особенности нутритивной поддержки пациентов в условиях хирургического отделения // Международный научно-исследовательский журнал. 2016. № 4-5 (46). С. 117-119.
19. Решетов И.В., Егоров Г.Н. Предоперационная нутритивная терапия пациентов с опухолями головы и шеи // Журнал Общероссийской общественной организации "Федерация специалистов по лечению заболеваний головы и шеи". 2013. № 2. С. 27-34.
20. Замолодчикова Т.С. Сериновые протеазы слизистой тонкого кишечника - локализация, функциональные свойства, физиологическая роль обзор // Биохимия. 2012. Т. 77, № 8. С. 989-1001.
21. Кузнецов В.М. Основы научных исследований в животноводстве. Киров : Зональный НИИСХ Северо-Востока, 2006. 568 с.
22. Разина А.В., Фролова А.И., Сергеев М.А. Оптимизация метода общей анестезии на кроликах // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2010. № 1 (5). С. 3-8.
23. Григорюк А.А., Ковалев В.А. Применение сетчатых полипропиленовых имплантатов в лечении послеоперационных вентральных грыж: экспериментальное и клиническое исследование // Дальневосточный медицинский журнал. 2010. № 2. С. 23-26.
24. Сидорова К.А. Морфология желудка кроликов и качественные показатели их продукции // Аграрный вестник Урала. 2013. № 3. С. 30-32.
25. Мишина Е.С., Затолокина М.А., Нетяга А.А., Климова Л.Г., Жуковский В.А. Реактивные изменения соединительной ткани передней брюшной стенки в раннем послеоперационном периоде при использовании опытных образцов сетчатых эндопротезов с антибактериальным покрытием // Современные проблемы науки и образования. 2015. № 2. С. 55.
26. Бонцевич Д.Н., Голубев О.А. Применение улучшенного шовного материала в эксперименте // Проблемы здоровья и экологии. 2004. № 2. С. 141-144.
27. Qu S., Xia J., Yan J., Wu H., Wang H., Yi Y. et al. In vivo and in vitro assessment of the biocompatibility and degradation of high-purity Mg anastomotic staples // J. Biomater. Appl. 2017. Vol. 31, N 8. P. 1203-1214. DOI: https://doi.org/10.1177/0885328217692948
28. Wang Z.G., Huang Y.D., Cheng K.L., Cai X.B., Wu Z., Zhan J.D. Influence of blood supply of the esophageal and gastric stumps on anastomotic healing after esophagogastrostomy in rabbits // Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. 2004. Vol. 24, N 3. P. 345-346, 351.
29. Виноградов С.Ю., Криштоп В.В., Диндяев С.В., Торшилова И.Ю. Опыт применения учебно-методического пособия "Графологическая структура курса частой гистологии" // Современные проблемы науки и образования. 2009. № 1. С. 45.
30. Маркосьян С.А., Власов А.П. Экспериментальная оценка изменений в тканях двухрядного тонкокишечного анастомоза в различном возрасте // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. 2018. № 1 (45). С. 18-26.
31. Bazmara H., Soltani M., Raahemifar K., Sefidgar M., Bazargan M., Naeenian M.M. et al. Activation of apoptotic signal in endothelial cells through intracellular signaling molecules blockade in tumor-induced angiogenesis // Biomed. Res. Int. 2015. Vol. 2015. Article ID 908757. DOI: https://doi.org/10.1155/2015/908757