Рак молочной железы (РМЖ) является одной из наиболее актуальных проблем современной онкологии, что в первую очередь обусловлено высокой заболеваемостью и смертностью. В настоящее время ведется поиск иммуногистохимических (ИГХ) и генетических факторов прогноза РМЖ, их взаимосвязи с регионарным и отдаленным метастазированием, с возможностью использования этих маркеров в качестве таргетных мишеней в лечении РМЖ. Ген TRMT2A (синоним HTF9C, HpaII tiny fragments locus 9C) расположен на длинном плече 22-й хромосомы (22q11.21), кодирует белок-гомолог A тРНК метилтрансферазы 2, несет функцию распознавания РНК на N-конце и домен урацил-C5-метилтрансферазы семейства TrmA на C-конце. Экспрессия гена TRMT2A варьирует в течение клеточного цикла [1]. Клетки с высокой экспрессией гена TRMT2A обладают пониженной пролиферативной активностью. Таким образом, ген TRMT2A играет ингибирующую роль в контроле клеточного цикла и пролиферации клеток и может рассматриваться перспективной целью в плане регуляции клеточного цикла опухолевых клеток [2]. В связи с этим B. Ring и соавт. включили продукт гена TRMT2A, белок HTF9C, в ИГХ-панель, состоящую из 5 маркеров (p53, NDRG1, CEACAM5, SLC7A5 и HTF9C), и в регрессионную модель с участием 6 маркеров (p53, PR, Ki67, NAT1, SLC7A5 и HTF9C) как статистически значимых предикторов худшего прогноза у пациенток с люминальными подтипами РМЖ [3]. Также HTF9C был включен в ИГХ-панель Mammostrat (Clarient Diagnostic Services, Inc, Aliso Viejo, CA, USA), состоящую из 5 маркеров (SLC7A5, HTF9C, р53, NDRG1 и CEACAM5), обладающую высокой прогностической и предиктивной значимостью в отношении риска прогрессирования гормон-позитивного РМЖ и его ответа на антиэстрогеновую терапию тамоксифеном [4-5]. Таким образом, HTF9C может служить маркером стратификации пациентов по риску прогрессирования РМЖ и его метастазированию [6].
D. Hicks и соавт. показали в исследовании, что HTF9C коррелирует с агрессивным клиническим течением HER2-позитивных опухолей молочной железы и может служить прогностическим маркером ответа РМЖ на химио- и таргетную терапию анти-HER2-препаратами [7].
Таким образом, TRMT2A (HTF9C) участвует в регуляции клеточного цикла и является новым важным прогностическим маркером в диагностике РМЖ. Его взаимосвязь с регионарным метастазированием РМЖ не описана в современной литературе. В нашем исследовании были проведены анализ экспрессии белка HTF9C в опухолевой ткани РМЖ и его корреляция с наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах (ЛУ).
Цель - изучить особенности экспрессии белка HTF9C в первичной опухоли РМЖ и выявить его взаимосвязь с регионарным метастазированием.
Материал и методы
В исследование вошли 358 пациенток с морфологически верифицированным инвазивным РМЖ, проходивших лечение в ФГБУ "НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова" Минздрава России. Основным критерием включения пациенток в исследование был первично операбельный РМЖ. Критерии исключения: неоадъювантная терапия, другие злокачественные новообразования, наличие острых воспалительных инфекционных и неинфекционных заболеваний. В анализ были включены гистологические препараты, а также анамнестические, клинические, лабораторно-инструментальные данные и другие материалы историй болезни и амбулаторных карт больных. На все исследования было получено разрешение этической комиссии ФГБУ "НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова" Минздрава России.
ИГХ-исследование было выполнено на 358 тканевых образцах РМЖ с использованием концентрированного мышиного моноклонального антитела Anti-HTF9C/TRMT2A (клон OTI1C3, производитель OriGene Technologies, США) в разведении 1:100. Оценку экспрессии HTF9C проводили по наличию ядерного окрашивания в опухолевых клетках, при этом РМЖ считали HTF9C-позитивным при ядерном окрашивании более 10% раковых клеток (рис. 1).
&hide_Cookie=yes)
Материалы исследования были подвергнуты статистической обработке с использованием методов параметрического и непараметрического анализа. Накопление, корректировку, систематизацию исходной информации и визуализацию полученных результатов осуществляли в электронных таблицах Microsoft Office Excel 2016. Статистический анализ проводили с использованием программы IBM SPSS Statistics v.26 (разработчик - IBM Corporation). Для качественных признаков данные представлены в виде абсолютного числа и доли в процентах [n (%)]. Для изучения связи категориальных переменных использовали тест χ2 Пирсона, при малом количестве наблюдений - точный тест Фишера, ассоциацию считали статистически значимой при p<0,05. Для сравнения количественных переменных между группами пациентов использовали тест Манна-Уитни, различия считали статистически значимыми при p<0,05. Для оценки ассоциации потенциальных предикторов наличия метастатических лимфатических узлов использовали простые бинарные логистические регрессионные модели с оценкой отношения шансов (ОШ) с соответствующими 95% доверительными интервалами (95% ДИ).
Результаты и обсуждение
На основании полученных данных ИГХ-исследования HTF9C-негативные опухоли были диагностированы в 81 (22,6%) случае РМЖ, HTF9C-позитивные опухоли - в 277 (77,4%) случаях. Все случаи РМЖ были разделены на 2 группы исследования в зависимости от метастатического поражения регионарных ЛУ: с отсутствием метастазов (pN0) − 226 (63,1%) случаев и с наличием метастазов (pN1-3) − 132 (36,9%) случая. Основные клинические и морфологические параметры первичной опухоли представлены в табл. 1.
&hide_Cookie=yes)
У большинства пациенток (63%) выполнялась классическая лимфодиссекция, в то время как у 37% производилась биопсия сигнальных ЛУ. В процессе аксиллярной хирургии в среднем удалялось 8,87 (5,77) ЛУ. В среднем количество пораженных метастазами ЛУ составило 3,51 (3,73), при этом максимальное количество обнаруженных метастатических узлов было равно 25. Чаще всего выявлялся метастаз в 1 ЛУ - в 72 (37,7%) случаях. рN1a стадия отмечалась в большинстве случаев − 135 (70,7%). pN2a статус пораженных метастазами ЛУ выявлялся в 20% (38) случаев. В 18 (9,4%) случаях было обнаружено 10 метастазов и более.
Не было выявлено статистически значимой взаимосвязи экспрессии HTF9C с возрастом пациенток по бинарной системе деления на группы с пороговым значением 50 лет как в общей группе, так и в двух группах исследования по метастатическому поражению ЛУ (р=0,344 в общей группе, р=0,784 для pN0 и р=0,378 для pN1-3). Частота экспрессии HTF9C в группе пациенток младше 50 лет составила 87 случаев (80,6%), в группе пациенток старше 50 лет - 190 случаев (76,0%). В группе с отсутствием метастатического поражения ЛУ при РМЖ частота экспрессии HTF9C была сравнительно одинаковой в обеих возрастных группах (72,6 и 70,7% соответственно). В группе с наличием метастазов РМЖ в ЛУ частота экспрессии HTF9C была выше в группе пациенток младшей возрастной группы (42 случая, 91,3%), чем в группе пациенток старше 50 лет (74 случая, 86,0%). Как в группе с отсутствием экспрессии HTF9С, так и в группе с наличием экспрессии HTF9С не было получено статистически значимых различий риска выявления метастатического поражения ЛУ при РМЖ в зависимости от возрастных групп пациенток (р=0,925 и р=0,144 соответственно).
Размер опухолевого узла по классификации pTNM не имел статистически значимой взаимосвязи с наличием экспрессии HTF9C как в общей группе исследования (р=0,584), так и в двух группах исследования по метастатическому поражению ЛУ (р=0,475 для pN0 и р=0,746 для pN1-3). В группе с отсутствием метастазов РМЖ в ЛУ и размером опухолевого узла более 2 см (рТ2-3) частота случаев с отсутствием экспрессии HTF9C была выше (30,8%), чем при положительном статусе экспрессии маркера (26,1%). В группе с наличием метастазов РМЖ в ЛУ и размером опухолевого узла более 2 см (рТ2- 3) частота случаев с отсутствием экспрессии HTF9C была ниже (50,0%), чем при положительном статусе экспрессии маркера (54,3%). Однако различия были статистически не значимы (р=0,147).
В группе рТ1 частота выявления метастатического поражения ЛУ при наличии экспрессии HTF9C составила 30,8%, при отсутствии экспрессии маркера - 15,1%, различия были статистически значимы (р=0,024). Шанс верификации метастазов в ЛУ при РМЖ в группе РМЖ с размером опухолевого узла ≤2 был в 2,51 раза выше при наличии экспрессии HTF9C, чем при его отсутствии в опухолевой ткани (95% ДИ 1,11-5,68). Между сопоставляемыми признаками отмечалась слабая связь (V=0,150). В группе рТ2-3 частота обнаружения метастазов РМЖ в ЛУ при наличии экспрессии HTF9C составила 60,0%, при отсутствии экспрессии маркера - 28,6%, различия были статистически значимы (р=0,003). Шанс верификации метастазов в ЛУ при РМЖ в группе РМЖ с размером опухолевого узла >2 см был в 3,75 раза выше при наличии экспрессии HTF9C, чем при его отсутствии в опухолевой ткани (95% ДИ 1,51-9,29). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,257) (табл. 2).
&hide_Cookie=yes)
Наибольшая частота случаев с положительной экспрессией HTF9C отмечалась в специфических гистологических типах РМЖ (82,0%), наименьшая - в дольковом типе РМЖ (68,5%). Однако не было установлено статистически значимых различий исследуемых по наличию экспрессии HTF9C в зависимости от гистологического варианта РМЖ по классификации ВОЗ 2019 г. как в общей группе исследования (р=0,309), так и в двух группах сравнения по метастатическому поражению ЛУ (р=0,273 для pN0 и р=0,334 для pN1-3). Во всех гистологических типах РМЖ риск обнаружения метастатического поражения ЛУ выше при положительной экспрессии HTF9C, чем при отсутствии его экспрессии в опухолевой ткани. Однако при post-hoc анализе не было обнаружено статистически значимой взаимосвязи наличия метастазов РМЖ в ЛУ и экспрессии HTF9C в протоковом и специфическом подтипах РМЖ (р=0,341 и р=0,187 соответственно). В дольковом подтипе РМЖ шанс обнаружения метастатического поражения ЛУ в 3,97 раза выше при положительном статусе HTF9C экспрессии, чем при его отсутствии (95% ДИ 1,07-16,16). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,272). В смешанном подтипе РМЖ шанс обнаружения метастатического поражения ЛУ в 5,29 раза выше при положительном статусе HTF9C экспрессии, чем при его отсутствии (95% ДИ 1,70-16,44). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,274).
Не было выявлено статистически значимой взаимосвязи статуса экспрессии HTF9C и степени злокачественности РМЖ как в общей группе исследования (р=0,160), так и в группе с наличием метастатического поражения ЛУ (р=0,626). В группе с отсутствием метастазов РМЖ в ЛУ степень злокачественности рака была значимо связана со статусом экспрессии HTF9C (р=0,042). Полученные различия были обусловлены более высокой частой экспрессии HTF9C в группе РМЖ высокой степени злокачественности (84,9%) по сравнению с группами РМЖ умеренной и низкой степени злокачественности (66,9 и 67,6% соответственно). В группе РМЖ низкой степени злокачественности с отсутствием экспрессии HTF9C был диагностирован только один случай РМЖ с наличием метастазов в ЛУ (8,3%). В группе РМЖ умеренной степени злокачественности статистически значимо чаще выявлялись случаи с наличием метастатического поражения ЛУ при положительной экспрессии HTF9C (70 случаев, 42,9%), чем при его отсутствии (9 случаев, 16,4%) (р<0,001). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,240). В группе РМЖ высокой степени злокачественности частота случаев с наличием метастазов рака в ЛУ была сопоставимой как при положительном статусе РМЖ по экспрессии HTF9C (32 случая, 41,6%), так и при негативном статусе опухоли по экспрессии HTF9C (6 случаев, 42,9%), различия были статистически не значимы (р=0,928).
Частота положительной экспрессии HTF9C была выше в группе РМЖ с эстроген-негативным статусом рака (46 случаев, 90,2%), чем в группе опухолей с позитивной экспрессией эстрогеновых рецепторов (231 случай, 75,2%). Различия были статистически значимы (р=0,018). Шанс обнаружения положительной экспрессии HTF9C при эстроген-позитивном статусе РМЖ в 3,03 раза ниже, чем при отсутствии экспрессии эстрогеновых рецепторов (95% ДИ 1,16-7,87). Между сопоставляемыми признаками отмечалась слабая связь (V=0,125). Аналогичные статистически значимые различия были получены и для групп с отсутствием метастатического поражения ЛУ (р=0,002). В группе pN0 шанс обнаружения положительной экспрессии HTF9C при эстроген-позитивном статусе РМЖ в 5,52 раза ниже, чем при отсутствии экспрессии эстрогеновых рецепторов (95% ДИ 1,63-18,87). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,202).
В группе с наличием метастазов РМЖ в ЛУ не было выявлено статистически значимой взаимосвязи экспрессии HTF9C с экспрессией эстрогеновых рецепторов (р=0,793). Частота случаев с положительной экспрессией HTF9C и эстроген-позитивным статусом РМЖ была сопоставимой с частотой случаев с отсутствием экспрессии HTF9C и эстроген-позитивным статусом РМЖ (85,7 и 88,1% соответственно). В группе эстроген-позитивного РМЖ риск обнаружения метастазов в ЛУ выше при верификации положительной экспрессии HTF9C в опухолевой ткани (104 случая, 45,0%), чем при отсутствии экспрессии маркера (14 случаев, 18,4%), различия были статически значимы (р<0,001).
Не было обнаружено статистически значимой взаимосвязи экспрессии HTF9C с экспрессией рецепторов прогестерона и в двух группах исследования по метастатическому поражению ЛУ (р=0,080 для pN0 и р=0,158 для pN1-3). В группе прогестерон-позитивного РМЖ шанс выявления метастазов РМЖ в ЛУ в 4,27 раза выше при положительной экспрессии HTF9C (91 случай, 44,6%), чем при отсутствии его экспрессии (10 случаев, 15,9%) (95% ДИ 2,06-8,86). Различия были статистически значимы (р<0,001). Между сопоставляемыми признаками отмечалась средняя связь (V=0,252). В группе прогестерон-негативного РМЖ аналогичных статистически значимых различий не было получено (р=0,942). В группе РМЖ с положительной экспрессией HTF9C шанс выявления метастатического поражения ЛУ был сопоставим с группой РМЖ с отсутствием экспрессии маркера (34,2 и 33,3% соответственно).
Не было получено статистически значимых различий экспрессии HTF9C в зависимости от наличия экспрессии белка HER2 как в общей группе исследования (р=0,140), так и в двух группах сравнения по метастатическому поражению ЛУ (р=0,079 для pN0 и р=0,879 для pN1-3). Частота положительной экспрессии HTF9C в опухолях с HER2-негативным статусом составила 76,3%, а в РМЖ с HER2-позитивным статусом - 86,8%.
При бинарном делении индекса пролиферативной активности (Ki-67) на две группы с пороговым значением в 30% была выявлена статистически значимая взаимосвязь экспрессии HTF9C с Ki-67 как в общей группе исследования (р=0,036), так и в группе с отсутствием метастатического поражения ЛУ (р=0,004). Полученные различия были обусловлены более высокой частотой экспрессии HTF9C в группе РМЖ с индексом пролиферативной активности 30% и более (107 случаев, 83,6%) по сравнению с группой опухолей с Ki-67<30% (170 случаев, 73,9%). В группе РМЖ с отсутствием метастатического поражения ЛУ шанс верификации положительной экспрессии HTF9C в опухолевой ткани РМЖ в 2,59 раза был выше, чем обнаружение случаев с отсутствием его экспрессии (95% ДИ 1,33-5,07). Между сопоставляемыми случаями отмечалась слабая связь (V=0,190). В группе РМЖ с наличием метастазов в ЛУ частота случаев с позитивной экспрессией HTF9C в группе РМЖ с индексом пролиферативной активности менее 30% составила 89,4% (76 случаев), в группе РМЖ с Ki-67 ≥30% - 85,1% (40 случаев), различия были статистически не значимы (р=0,468).
Не выявлено статистически значимой взаимосвязи наличия экспрессии HTF9C с молекулярно-биологическим подтипом опухоли (р=0,103). Во всех молекулярно-биологических подтипах РМЖ частота случаев с отсутствием экспрессии HTF9C встречалась реже, чем в 1/3 случаев. Чаще всего положительная экспрессия маркера HTF9C диагностировалась в тройном негативном подтипе РМЖ (в 33 случаях, 91,7%), реже всего - в люминальном А подтипе РМЖ (в 121 случае, 72,9%). В HER2-позитивных подтипах РМЖ случаи с экспрессией HTF9C встречались с одинаковой частотой независимо от экспрессии эстрогеновых рецепторов (в 85,7% случаев в люминальном В HER2-позитивном подтипе и в 86,7% в нелюминальном HER2-позитивном подтипе РМЖ). При этом в люминальном В HER2-негативном подтипе РМЖ позитивная экспрессия HTF9C встречалась несколько реже (в 76,7% случаев), чем при люминальном В HER2-позитивном подтипе РМЖ (86,7%), однако эти различия не достигали статистической значимости (рис. 2).
&hide_Cookie=yes)
Для определения предиктивной роли экспрессии HTF9C в процессе регионарного метастазирования РМЖ был проведен однофакторный анализ корреляции статуса экспрессии маркера с наличием метастазов РМЖ в ЛУ с помощью критерия χ2 Пирсона. В группе пациенток без метастазов в ЛУ РМЖ статистически значимо чаще отсутствовала экспрессия HTF9C (65 случаев, 80,2%) по сравнению с группой пациенток с наличием метастазов в регионарных ЛУ (16 случаев, 19,8%) (р<0,001). Шанс обнаружения метастатического поражения ЛУ при положительном статусе HTF9C в 2,93 раза выше, чем при отсутствии его экспрессии (95% ДИ 1,61-5,32). Между сопоставляемыми признаками отмечалась слабая связь (V=0,192) (рис. 3).
&hide_Cookie=yes)
Заключение
Таким образом, HTF9C статистически значимо коррелирует с экспрессией эстрогеновых рецепторов, с индексом пролиферативной активности опухолевых клеток (Ki-67) и с метастазированием РМЖ в регионарные ЛУ. При отсутствии экспрессии маркера вероятность метастазирования ниже. Отсутствие статистически значимой взаимосвязи экспрессии HTF9C со многими клинико-морфологическими и ИГХ-параметрами РМЖ и наличие статистически значимой взаимосвязи экспрессии маркера с метастатическим поражением ЛУ при РМЖ позволяет предположить, что HTF9C является независимым предиктором метастазирования РМЖ в регионарные ЛУ, и это требует дальнейшего подтверждения полученных результатов на более крупной когорте пациентов.